Газета «Новости медицины и фармации» 18(341) 2010

Целью исследования было изучение влияния энтеросорбента Энтеросгель, паста для перорального применения, производства ПрАО «ЭОФ «КРЕОМА-ФАРМ» (г. Киев, Украина), на функцию почек у крыс в условиях экспериментальной почечной недостаточности.

Материалы и методы исследования

В эксперименте использованы 40 белых крыс, которые содержались на стандартном рационе вивария [2]. Животные были разделены на три группы: 1-я — интактные (n = 8); 2-я (контрольная) — животные с почечной недостаточностью (n = 16); 3-я — животные, которые получали Энтеросгель на фоне экспериментальной почечной недостаточности (n = 16).

Для моделирования острой почечной недостаточности (ОПН) крыс выдерживали 24 часа без еды, после чего внутримышечно вводили 50% водный раствор глицерола в дозе 10 мл на 1 кг массы тела животного [11]. Третьей группе животных вводили Энтеросгель за 1 час до введения им глицерола. В дальнейшем сорбент животные получали ежедневно интрагастрально в дозе 650 мг/кг массы тела на протяжении 14 суток.
Всех животных помещали в обменные клетки, собирали мочу в условиях спонтанного диуреза в течение 24 часов и изучали функциональное состояние почек [1]. Определяли суточный диурез, скорость клубочковой фильтрации (СКФ), реабсорбцию воды в почечных канальцах и на основании этих показателей рассчитывали относительный диурез. В пробах мочи определяли белок, креатинин, мочевину [1] и рассчитывали суточную экскрецию белка, креатинина и мочевины. В пробах крови определяли содержание белка, креатинина, мочевины и молекул средней массы [3, 6, 8].

Опыты были проведены в 2 этапа. На первом этапе исследовали функциональные показатели почек на 3-и сутки после введения глицерола (фаза полиурии). При этом суточную мочу собирали в обменных клетках, кровь для исследования креатинина забирали из хвостовой вены. На 2-м этапе для выяснения эволюции патологического процесса при глицероловом поражении почек у крыс, в частности, возможности формирования хронической почечной недостаточности (ХПН), была выполнена отдельная серия опытов на этих же животных через 45 суток после введения им глицерола. Для этого тоже собирали суточную мочу, после чего животных умерщвляли путем декапитации под тиопенталовым наркозом. В крови определяли содержание белка, креатинина, мочевины и молекул средней массы.

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты проведенных исследований приведены ниже. В ходе эксперимента зафиксирована гибель животных: до проведения 1-го этапа исследований во 2-й группе погибло 2 особи, до проведения 2-го этапа во 2-й группе погибло 4 особи, в 3-й группе — 2 особи.

При изучении суточного диуреза, который исследовали в полиурической стадии ОПН, установлено повышение этого показателя по сравнению с интактными животными в 2,9 раза (табл. 1). Отчасти это может быть связано с тем, что глицерол является осмотическим диуретиком, что согласовывается с данными литературы [8].

После введения крысам с острой почечной недостаточностью препарата Энтеросгель суточный диурез снизился на 16 % по сравнению с животными контрольной группы, но значительно превышал уровень интактных (в 2,5 раза). Введение глицерола сопровождалось достоверным снижением СКФ, рассчитанным по клиренсу эндогенного креатинина (в 1,9 раза), что свидетельствует о глубокой степени поражения клубочкового аппарата. Энтеросгель оказывал умеренное положительное действие на этот показатель — зафиксировано увеличение СКФ на 12,5 %, что, однако, достоверно не отличалось от контроля.

Потребление воды животными с экспериментальной ОПН было достоверно выше (на 45,2 %), чем у интактных, и составляло 13,5 мл/100 г за сутки, что можно объяснить дегидратирующим действием глицерола. Введение Энтеросгеля сопровождалось снижением данного показателя на 15 %. Рассчитанный нами показатель реабсорбции воды в почечных канальцах демонстрировал положительное влияние сорбента на этот важный показатель канальцевого аппарата почек.

Основываясь на показателях суточного диуреза и потребления воды, рассчитывали относительный диурез. У животных с ОПН этот показатель возрос в 2,1 раза по сравнению с интактными. Применение Энтеросгеля также приводило к снижению этого показателя, однако результаты были недостоверными по сравнению с контролем.

Одним из показателей, характеризующих функциональное состояние почек, является креатинин, который не реабсорбируется в почечных канальцах, поэтому его содержание в моче является показателем фильтрационной способности почек. При нарушении функции почек достоверно увеличивается содержание креатинина в крови. После развития у животных ОПН его концентрация повысилась в 4,5 раза, а введение Энтеросгеля вызывало снижение содержания креатинина на 32 % по сравнению с нелечеными животными, хотя оно в 1,24 раза превышало уровень интактных животных.

Мы наблюдали увеличение содержания креатинина в моче, что может быть следствием значительного увеличения его в крови. После введения крысам с почечной недостаточностью Энтеросгеля наблюдалось снижение содержания креатинина в моче на 31 % относительно уровня животных контрольной группы.

Проведено исследование суточного выделения белка с мочой (табл. 1). Выделение белка животными контрольной группы увеличивается в 1,3 раза, что может быть связано с повышением проницательности почечного фильтра. Энтеросгель оказал положительное влияние на этот показатель — наблюдалась тенденция к снижению повышенного содержания белка в моче, отмеченного после развития почечной недостаточности.

Опыты, выполненные через 45 суток после моделирования глицероловой ПН, показали, что у крыс сформировалось хроническое нарушение выделительной функции почек (табл. 2). Об этом свидетельствовали значительное — почти двукратное — снижение СКФ, гиперкреатининемия (концентрация креатинина превышала показатель интактных животных почти в 4 раза, р < 0,01) и сохраняющаяся протеинурия (суточная экскреция белка превышала аналогичный показатель интактных животных более чем в 3,3 раза, р < 0,01).

Коррекция Энтеросгелем существенно влияла на основные показатели функционального состояния почек. Нами зафиксировано достоверное увеличение СКФ, которая в 1,9 раза превосходила аналогичный показатель пораженных животных и почти приближалась к уровню интактных. Достоверно снижался также показатель суточного выделения белка с мочой и содержание креатинина в крови, что указывает на существенное увеличение фильтрационной способности почек. Увеличивалась также реабсорбция воды почечными канальцами.
При изучении биохимических показателей крови (табл. 3) установлено существенное снижение концентрации белка в плазме крови животных с ХПН: у интактных животных этот показатель составлял 65,00 ± 2,50 г/л, а у животных с почечной недостаточностью — в 1,2 раза ниже (53,00 ± 1,85 г/л).

Одной из причин снижения содержания белка, кроме повышенной экскреции с мочой, может быть распад белковых молекул с образованием молекул средней массы, что подтверждается полученными результатами исследований. Это указывает на развитие эндогенной интоксикации в пораженном организме, поскольку именно молекулы средней массы являются критерием эндогенной интоксикации [9].

Исследование содержания молекул средней массы (МСМ), в частности фракции МСМ1, в которой преобладают цепочечные аминокислоты, показало, что оно повышается в пораженном организме в 1,5 раза через 45 дней от начала введения глицерола. Аналогичная тенденция наблюдалась и относительно фракции МСМ2 (с преобладанием ароматических аминокислот) — содержание ее увеличилось в 2 раза. Введение Энтеросгеля привело к снижению содержания молекул средней массы обеих фракций: для МСМ1 — на 26 % по сравнению с пораженными животными, для МСМ2 — на 66 %.

При изучении содержания мочевины в сыворотке крови крыс с почечной недостаточностью обнаружено, что на 45-е сутки после введения глицерола содержание мочевины повышается в 2 раза, что свидетельствует о развитии уремии в исследуемый период. Введение Энтеросгеля привело к достоверному (р < 0,05) снижению этого показателя, что указывает на положительное влияние энтеросорбента на белковый обмен.
Определение содержания мочевины в моче опытных животных выявило повышение ее содержания в 1,2 раза после введения крысам глицерола. Применение Энтеросгеля на 17 % снижало повышенное содержание мочевины в моче, и через 45 суток ее уровень превышал показатель интактных животных всего на 5 %.

Выводы

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что энтеросорбент Энтеросгель положительно влияет на функциональное состояние почек и показатели белкового обмена, эффективно снижает эндогенную интоксикацию в пораженном организме.