Международный неврологический журнал 3 (49) 2012

Использование глатирамера ацетата (ГА) в лечении рассеянного склероза (РС) приводит к функциональным изменениям циркулирующих моноцитов. Анализ генной экспрессии моноцитов под влиянием лечения позволит более глубоко узнать механизмы, лежащие в основе такого заболевания, как рассеянный склероз, и оценить потенциальное влияние глатирамера ацетата на течение данной патологии. Целью нашего исследования было выявление изменений транскриптома моноцитов и описание сайтов связывания факторов транскрипции в промоторных участках генов, отвечающих на воздействие ГА.

В исследование было включено 8 больных рассеянным склерозом, которым вводили ГА подкожно. Забор образцов периферической крови проводился до начала исследования, а также непосредственно перед инъекцией в 1-й день, на 1, 4 и 8-й неделе. Для выделения фракции клеток моноцитов был применен метод сортировки магнитно-активированных клеток (CD14). Затем была извлечена и мечена РНК. После этого была произведена гибридизация РНК с Affymetrix HG-Ul33 Plus 2.0. После первичной обработки данных, используя метод MAID, мы выявили гены, выраженно активированные или ингибированные в условиях терапии. В последующем были функционально описаны измененные гены с применением анализа представленности генов с использованием терминологии генной онтологии и KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes — Киотская энциклопедия генов и геномов). Молекулярное взаимодействие между генами изучалось с помощью программного обеспечения PathwayStudio, которое позволяет автоматически извлекать сведения по данному вопросу из литературной базы, а также информацию из базы данных UCSC относительно предполагаемых сайтов связывания факторов транскрипции.

На протяжении 2 месяцев лечения были определены 418 по-разному экспрессированных генов. Из них в 48 генах постоянно отмечались существенные изменения. У большинства пациентов наблюдалось подавление на ранней фазе CD163, маркера активности моноцитов, что подтверждает ранее полученные данные относительно способности ГА влиять на фактор активации. Также важно отметить повышенную активацию таких генов, как IL-18, -21, -27, которые считаются необходимыми для дифференциации клеток Th1 и Th17. ДНК-связывающие мотивы факторов транскрипции, известные своей способностью регулировать антивирусную активность, были представлены в генных промоторных участках, например IRF-1, -2, -7, -9, связанных с 35 генами, в частности с CD68, IDO, IL2RG, OASL, PPMIK. Иммунная система, взаимодействующая с функционально связанными генами, со временем существенно изменяется. Выявление комплекса молекулярных взаимодействий помогло определить тесно связанные гены, а именно CD34, CXCL10, CYP2, NOS1, OXT, PAM, PRKCA, VCAM, WARS.

В данном исследовании были установлены мРНК транскрипты моноцитов в крови, которые изменялись под воздействием терапии ГА. Кроме того, нами были выявлены факторы транскрипции и другие ключевые факторы регуляции, которые могут усилить влияние лекарственного средства, применяемого при терапии РС.

Исследование было проведено при поддержке
TevaPharmaceuticals.

Перевод с англ. Е. Евдокимовой