Международный эндокринологический журнал 1 (33) 2011

Введение

В настоящее время изучение полиморфизма генов регуляторных молекул воспаления приобретает особую актуальность. Знание их роли в патогенезе многих заболеваний наряду с достижениями современной геномики позволяет, с одной стороны, прогнозировать риск развития патологии или тяжесть ее протекания, с другой стороны, подобрать специфическую терапию, включая средства иммунокоррекции, для конкретного пациента [1, 2].

Сахарный диабет (СД) 2-го типа является важной медицинской и социальной проблемой. Это обусловлено как его значительной распространенностью, так и достаточно серьезным прогнозом заболевания с развитием тяжелых инвалидизирующих осложнений [3]. Более чем 300 млн человек, или 8,2 % взрослого населения мира, на данный момент имеют риск развития СД. Ежегодно из-за причин, связанных с развитием и прогрессированием СД, умирает около 3,8 млн человек [4].

Однако патогенез СД 2-го типа и эффективные способы лечения во всем мире остаются до конца не изученными.

Целью нашего исследования явилось изучение взаимосвязи генетического полиморфизма Toll-like рецепторов 4-го типа (TLR4), степени ответа на эндотоксин кишечной палочки (ЭТ) и различных иммунологических показателей у больных сахарным диабетом 2-го типа.

Материалы и методы

Для достижения поставленной цели нами была обследована группа из 60 больных СД 2-го типа и 23 человека контрольной группы.

Всем больным проводились стандартные клинико-инструментальные обследования, а также определялось содержание антиэндотоксиновых антител класса A (анти-ЭТ-IgA), С-реактивного белка (СРБ) в плазме крови и содержание секреторного иммуноглобулина класса А (sIgA) и антиэндотоксинового секреторного иммуноглобулина класса А (анти-ЭТ-sIgA) в слюне данных больных методом твердофазного иммуноферментного анализа (тИФА) с использованием протоколов, разработанных в лаборатории клинической иммунологии Крымского государственного медицинского университета. Определение эндотоксин-связывающих рецепторов на моноцитах и гранулоцитах периферической крови и фагоцитарной активности гранулоцитов периферической крови проводили методом проточной лазерной цитофлуориметрии [5–8]. У всех больных в результате бактериологического обследования установлен дисбактериоз кишечника II–III степени (ДК), по классификации О.Я. Бабак, И.Е. Кушнир (1998) [9].

Все полученные результаты подвергнуты статистической обработке для параметрических и непараметрических критериев с использованием программы MedStat (серийный номер MS0011) ДНПП ТОВ «Альфа», г. Донецк.

Результаты исследования и их обсуждение

При анализе распространенности полиморфизма Asp299Gly было установлено, что генотип GG имеют 6,67% больных, что достоверно отличается от группы контроля (р< 0,05). Гетерозиготный вариант данного гена характерен для 10,0 % больных, гомозиготы с аллелем А встречаются у 83,33 % больных, что не отличается от группы контроля (табл. 1). Таким образом, к развитию СД 2-го типа более предрасположены лица, имеющие в генотипе аллель G.

Была также изучена взаимосвязь между генетическим полиморфизмом Asp299Gly TLR4 и степенью ответа на ЭТ у больных СД 2-го типа. В результате проведенного исследования было выявлено, что все гипореспондеры имели генотип АА, в то время как среди нормо- и гиперреспондеров было выявлено 14,63 % больных с генотипом AG, 9,76 % больных с генотипом GG, остальные (75,61 %)— с генотипом АА (табл. 2).

Нами были изучены некоторые иммунологические показатели у больных со сниженным ответом на ЭТ, а также у нормо- и гиперреспондеров с генотипом АА и с генотипом, содержащим аллель G.

Нами было изучено состояние специфического гуморального (анти-ЭТ-IgA) и местного иммунитета (sIgA и анти-ЭТ-sIgA).

Как показано в табл. 3, уровень анти-ЭТ-IgA достоверно повышен как в группе гипореспондеров, так и в группе нормо- и гиперреспондеров с различными генотипами по сравнению с группой контроля. Однако уровень анти-ЭТ-IgA в группе нормо- и гиперреспондеров с генотипами G достоверно не отличался от группы гипорес­пондеров и был в 1,56 раза ниже, чем в группе нормо- и гиперреспондеров с генотипом АА. Таким образом, наиболее высокий уровень анти-ЭТ-IgA наблюдался в группе нормо- и гиперреспондеров с генотипом АА.

Уровень анти-ЭТ-sIgА также был повышен во всех группах наблюдения по сравнению с группой контроля. Уровень данного показателя достоверно не отличался в группе нормо- и гиперреспондеров с генотипом G по сравнению с группой гипореспондеров, в то время как по сравнению с группой нормо- и гиперреспондеров с генотипом АА уровень анти-ЭТ-sIgА достоверно ниже в 1,66 раза. Таким образом, наиболее высокий уровень анти-ЭТ-sIgA наблюдался в группе нормо- и гиперреспондеров с генотипом АА.

Уровень sIgА достоверно выше как в группе гипореспондеров, так и в группе нормо- и гиперреспондеров с различными генотипами по сравнению с группой контроля. Достоверных различий между группами сравнения выявлено не было (р > 0,05).

Для оценки степени выраженности воспалительного ответа при поступлении эндотоксина кишечной палочки в организм у больных СД 2-го типа нами был изучен уровень СРБ как одного из важнейших маркеров системного воспалительного ответа.

Было выявлено достоверное повышение уровня СРБ до 40,64 ± 3,34 и 48,65 ± 4,88 мкг/мл соответственно в группе нормо- и гиперреспондеров и до 38,98 ± 2,29 мкг/мл в группе гипореспондеров по сравнению с группой контроля. Однако в группе нормо- и гиперреспондеров с генотипом, содержащим аллель G, уровень СРБ был в 1,2 раза выше, чем в группе нормо- и гиперреспондеров с генотипом АА и в 1,25 раза выше, чем в группе гипореспондеров, что может свидетельствовать о более выраженном воспалительном ответе в данной группе больных СД 2-го типа (табл. 4).

Как показано в табл. 5, при анализе уровня экспрессии CD14 на моноцитах и гранулоцитах было выявлено увеличение количества CD14 рецепторов на моноцитах у больных нормо- и гиперреспондеров с генотипом, содержащим аллель G, до 22,12 ± 2,6 усл.ед. (р < 0,05). Количество CD14 рецепторов на моноцитах и гранулоцитах у нормо- и гиперреспондеров с генотипом АА достоверно не отличалось от группы контроля. В группе гипореспондеров отмечалось снижение количества данных рецепторов как на моноцитах— до 15,42 ± 1,71 усл.ед., так и на гранулоцитах— до 0,75± 0,02 усл.ед. по сравнению с группой контроля (р<0,05).

При анализе экспрессии ЭТ-R на моноцитах и гранулоцитах достоверных отличий между нормо- и гиперреспондерами с различными генотипами и группой контроля выявлено не было (р < 0,05). В группе гипореспондеров отмечалось достоверное снижение количества ЭТ-R на моноцитах — до 1,8 ± 0,12 усл.ед. и на гранулоцитах — до 1,19 ± 0,04 усл.ед. по сравнению с группой контроля (табл. 5).

Для анализа степени активности неспецифического иммунитета нами были изучены показатели фагоцитоза (процент фагоцитирующих клеток и интенсивность фагоцитоза). У нормо- и гиперреспондеров вне зависимости от генотипа отмечается повышение интенсивности фагоцитоза и увеличение процента фагоцитирующих клеток по сравнению с группой контроля. Между данными группами сравнения достоверных различий выявлено не было (р > 0,05). В группе гипореспондеров данные показатели достоверно не отличаются от группы контроля (р > 0,05). Таким образом, при повышенном и нормальном ответе на ЭТ происходит усиление неспецифической защиты организма, направленной на нейтрализацию ЭТ при его избыточном поступлении в условиях нарушения проницаемости кишечной стенки у больных СД 2-го типа.

Выводы

1. В связи с более выраженным повышением как гуморального, так и местного секреторного антиэндотоксинового иммуноглобулина класса А в группе нормо- и гиперреспондеров с генотипом АА можно предположить более выраженную степень защиты организма от отрицательного влияния ЭТ в данной группе по сравнению с гипореспондерами и нормо- и гиперреспондерами с генотипом G.

2. Экспрессия CD14 на моноцитах и гранулоцитах периферической крови в группе нормо- и гиперреспондеров с генотипом G повышена, что может свидетельствовать о более высокой чувствительности данной группы больных к избыточному поступлению ЭТ во внутреннюю среду организма больных СД 2-го типа по сравнению с гипореспондерами.

3. Степень воспалительной реакции в группе нормо- и гиперреспондеров с генотипом G выше по сравнению с гипореспондерами и нормо- и гиперреспондерами с генотипом АА.

4. Таким образом, можно предположить, что нормо- и гиперреспондеры с генотипом, содержащим аллель G, более предрасположены к развитию антиэндотоксиновой агрессии в условиях хронического воспаления при сахарном диабете 2-го типа и, как следствие, к более тяжелому течению сахарного диабета 2-го типа с быстрым развитием осложнений.